北京晟泽恒信电子科技有限公司
电路板维修专家
2018年1月21日 星期日
新闻中心-北京晟泽恒信电子科技有限公司
 你的位置:新闻中心 >> 新闻内容
  ※新闻内容

专业维修PCR仪及技术原理应用

2013-3-28
京晟泽专业维修PCR仪维修 PCR仪电路板维修 PCR仪电源维修 电泳仪维修.联系电话:15810134000吕工  13269165333马女士

维修品牌有:维修Bio-Rad伯乐公司(MJ)\维修德国Eppendorf\维修ABI美国维修应用生物公司(PE公司)\维修罗氏公司(Roche)LightCycler系列\维修英国Techne等所有进口品牌PCR仪和国产品牌的PCR仪等\

网址:www.bjszhxdz.com

地址:北京市朝阳区五里桥二街1号院10号楼1301

 

技术原理:

DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。在  聚合酶链式反应实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。
  但是,DNA聚合酶在高温时会失活,因此,每次循环都得加入新的DNA聚合酶,不仅操作烦琐,而且价格昂贵,制约了PCR技术的应用和发展。发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
工作原理

类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火(复性)--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时  聚合酶链式反应间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至40~60℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,于72℃左右,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

过程:  PCR反应的基本过程标准的PCR过程分为三步
  1.DNA变性(90℃-96℃):双链DNA模板在热作用下,
  氢键断裂,形成单链DNA
  2.退火(复性)(25℃-65℃):系统温度降低,引物与
  DNA模板结合,形成局部双链。
  3.延伸(68℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右最佳的活
  性)的作用下,以dNTP为原料,从引物的5′端→3′ 端延
  伸,合成与模板互补的DNA链。
  每一循环经过变性、退火和延伸,DNA含量既增加一倍。
  现在有些PCR因为扩增区很短,即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成,因此可以改为两步法,即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行,以减少一次升降温过程,提高了反应速度

 
Copyright (C)2005-2030 北京晟泽恒信电子科技有限公司 All rights reserved
地址:北京市朝阳区五里桥二街1号院中弘北京像素10号楼1301室 邮编:100024
电话:(010)52427233 15810134000 邮箱:15810134000@139.com
ICP备案号:京ICP备06024694号